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各種顯微鏡鏡檢術(shù)
閱讀：651 發(fā)布時(shí)間：2021-9-2如何用鏡檢術(shù)：在材料研究領(lǐng)域，反射式明場(chǎng)顯微鏡得到廣泛應(yīng)用，在此基礎(chǔ)上各種特殊的鏡檢方法也得到應(yīng)用，如暗場(chǎng)，偏光，相襯，干涉，熒光，這些鏡檢方法在高檔顯微鏡上均能同時(shí)實(shí)現(xiàn)。
一.明視野觀察(Bright field)
明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式，廣泛應(yīng)用于病理、檢驗(yàn)，用于觀察被染色的切片，所有顯微鏡均能完成此功能。在此不再贅述。
二.暗視野觀察(Darkfield)
暗視野實(shí)際是暗場(chǎng)照明。它的特點(diǎn)和明視野不同，不直接觀察到照明的光線，而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此，視場(chǎng)成為黑暗的背景，而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的像。暗視野的原理是根據(jù)光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)像，微塵在強(qiáng)光直射通過(guò)的情況下，人眼不能觀察，這是因?yàn)閺?qiáng)光繞射造成的。若把光線斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了體積，為人眼可見(jiàn)。暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點(diǎn)是不讓光束由下至上的通過(guò)被檢物體，而是將光線改變途徑，使其斜射向被檢物體，使照明光線不直接進(jìn)入物鏡，利用被檢物體表面反射或衍射的光形成明亮圖像。暗視野觀察的分辨率遠(yuǎn)高于明視野觀察，達(dá)0.02—0.004mm。
三.相襯鏡檢法(Phasecontrast)
在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過(guò)程中，相襯鏡檢術(shù)的發(fā)明成功，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。我們知道，人眼只能區(qū)分光波的波長(zhǎng)(顏色)和振幅(亮度)，對(duì)于無(wú)色通明的生物標(biāo)本，當(dāng)光線通過(guò)時(shí)，波長(zhǎng)和振幅變化不大，在明場(chǎng)觀察時(shí)很難觀察到標(biāo)本。
相襯顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢，也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)像，將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o(wú)色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見(jiàn)。這大大便利了活體細(xì)胞的觀察，因此相襯鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡。
1. 相襯鏡檢法在裝置上與明場(chǎng)不同，有一些特殊要求：
( 1 ) 環(huán)狀光闌(Ringslit)：裝在聚光鏡的下方，而與聚光鏡組合為一體——相襯聚光鏡。它是由大小不同的環(huán)形光闌裝在一圓盤內(nèi)，外面標(biāo)有10X、20X、40X、100X等字樣，與相對(duì)應(yīng)倍數(shù)的物鏡配合使用。
( 2 ) 相板(Phase plate)：裝在物鏡的后焦平面處，它分為兩部分，一是通過(guò)直射光的部分，為半透明的環(huán)狀，叫共軛面;另一是通過(guò)衍射光的部分，叫“補(bǔ)償面”。有相板的物鏡稱“相襯物鏡”，外殼上常有“Ph”字樣。
2. 相襯鏡檢法是一種比較復(fù)雜的鏡檢方法，想要得到好的觀察效果，顯微鏡的調(diào)試非常重要。除此之外還應(yīng)注意以下幾個(gè)方面。
( 1 )光源要強(qiáng)，全部開(kāi)啟孔徑光闌;
( 2 ) 使用濾色片，使光波近于單色;
四.微分干涉相襯鏡檢術(shù)(Differential interferencecontrast DIC)
微分干涉相襯鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代，它不僅能觀察無(wú)色透明的物體，而且圖像呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感，并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn)，觀察效果更為逼真。
1.原理
微分干涉相襯鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來(lái)分解光束。分裂出來(lái)的光束的振動(dòng)方向相互垂直且強(qiáng)度相等，光束分別在距離很近的兩點(diǎn)上通過(guò)被檢物體，在相位上略有差別。由于兩光束的裂距極小，而不出現(xiàn)重影現(xiàn)像，使圖像呈現(xiàn)出立體的三維感覺(jué)。
2.微分干涉相襯鏡檢術(shù)所需的特殊部件：
(1)起偏鏡
(2)檢偏鏡
(3)渥拉斯頓棱鏡2 塊
3.微分干涉鏡檢時(shí)的注意事項(xiàng)
(1)因微分干涉相襯靈敏度高，制片表面不能有污物和灰塵。
(2)具有雙折射性的物質(zhì)，不能達(dá)到微分干涉相襯鏡檢的效果。
(3)倒置顯微鏡應(yīng)用微分干涉相襯時(shí)，不能用塑料培養(yǎng)皿。
五 .熒光鏡檢術(shù)
熒光鏡檢術(shù)是用短波長(zhǎng)的光線照射用熒光素染色過(guò)的被檢物體，使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光，然后觀察。熒光鏡檢術(shù)廣泛應(yīng)用于生物，醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。
1.熒光鏡檢術(shù)一般分為透射和落射式兩種類型。
(1)透射式：激發(fā)光來(lái)自被檢物體的下方，聚光鏡為暗視野聚光鏡，使激發(fā)光不進(jìn)入物鏡，而使熒光進(jìn)入物鏡。它在低倍情況下明亮，而高倍則暗，在油浸物鏡下較難操作，尤以低倍的照明范圍難于確定，但能得到很暗的視野背景。透射式不適用于非透明的被檢物體。
(2)落射式：透射式目前幾乎被淘汰，新型的熒光顯微鏡多為落射式，光源來(lái)自被檢物體的上方，在光路中具有分光鏡，所以對(duì)透明和不透明的被檢物體都適用。由于物鏡起了聚光鏡的作用，不僅便于操作，而且從低倍到高倍，可以實(shí)現(xiàn)整個(gè)視場(chǎng)的均勻照明。
2.熒光鏡檢術(shù)的注意事項(xiàng)
(1)激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間的照射，會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)像，因此盡可能縮短觀察時(shí)間，暫時(shí)不觀察時(shí)，應(yīng)用擋板遮蓋激發(fā)光。
(2)作油鏡觀察時(shí)，應(yīng)用“無(wú)熒光油”。
(3)熒光幾乎都較弱，應(yīng)在較暗的室內(nèi)進(jìn)行。
(4)電源裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命，也會(huì)影響鏡檢的效果。
偏光顯微鏡
一.偏光顯微鏡的特點(diǎn)
偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質(zhì)，在偏光顯微鏡下就能分辨清楚，當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色發(fā)來(lái)進(jìn)行觀察，但有些則不可能，而必須利用偏光顯微鏡。偏光顯微鏡的特點(diǎn)，就是將普通光改變?yōu)槠膺M(jìn)行鏡檢的方法，以鑒別某一物質(zhì)是單折射(各向同行)或雙折射性(各向異性)。雙折射性是晶體的基本特性。因此，偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物，化學(xué)等領(lǐng)域。在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用。
二.偏光顯微鏡的基本原理
偏光顯微鏡的原理比較復(fù)雜，在此不作過(guò)多介紹,偏光顯微鏡必須具備以下附件(a)起偏鏡 (b)檢偏鏡 (c)專用無(wú)應(yīng)力物鏡(d)旋轉(zhuǎn)載物臺(tái)。
三.偏光鏡檢術(shù)的方式
(1) 正相鏡檢(Orthscope)：又稱無(wú)畸變鏡檢，其特點(diǎn)是使用低倍物鏡，不用伯特蘭透鏡(Bertrａnd Lens),同時(shí)為使照明孔徑變小，推開(kāi)聚光鏡的上透鏡。正相鏡檢用于檢查物體的雙折射性。
(2) 錐光鏡檢(Conoscope)：又稱干涉鏡檢，這種方法用于觀察物體的單軸或雙軸性。
四.偏光顯微鏡在裝置上的要求
(1)光源：采用單色光，因?yàn)楣獾乃俣龋凵渎剩透缮娆F(xiàn)像因波長(zhǎng)的不同而有差異。一般鏡檢可使用普通光。
(2) 目鏡：要帶有十字線的目鏡。
(3)聚光鏡：為了取得平行偏光，應(yīng)使用能推出上透鏡的搖出式聚光鏡。
(4)伯特蘭透鏡：這是把物體所有造成的初級(jí)相放大為次級(jí)相的輔助透鏡。
五. 偏光鏡檢術(shù)的要求
(1) 載物臺(tái)的中心與光軸同軸。
(2) 起偏鏡和檢偏鏡應(yīng)處于正交位置。
(3) 制片不宜過(guò)薄。
體視顯微鏡(Stereomicroscope)
體視顯微鏡又稱“實(shí)體顯微鏡”或“解剖鏡”，是一種具有正像立體感地目視儀器，被廣泛地應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)林、工業(yè)及海洋生物各部門。它具有如下地特點(diǎn)：
1. 雙目鏡筒中的左右兩光束不是平行，而是具有一定的夾角——體視角(一般為12度---15度)，因此成像具有三維立體感;
2. 像是直立的，便于操作和解剖，這是由于在目鏡下方的棱鏡把像倒轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)的緣故;
3. 雖然放大率不如常規(guī)顯微鏡，但其工作距離很長(zhǎng)
4. 焦深大，便于觀察被檢物體的全層。
5. 視場(chǎng)直徑大。