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熒光的共定位是生物顯微成像常見的技術(shù),兩個或者更多種不同顏色的熒光探針被用來標記不同的結(jié)構(gòu)/位點,使得其相互關(guān)系得以明晰地在合并的圖像上展現(xiàn)。隨著研究者對于實驗的要求越來越高,這些熒光共定位的成像逐漸被希望能用于熒光強度高速變化或者樣品本身位置不斷變化的實驗中,比如活動的斑馬魚、線蟲體內(nèi)兩類神經(jīng)細胞的熒光共定位成像。實驗中,樣品本身是運動的,兩個顏色成像時間間隔越短,越能夠反映熒光探針共定位的真實情況。?
在另外一些實驗中,同一個熒光探針的熒光顏色(波長)會隨著環(huán)境的變化而變化,前后兩種顏色熒光強度的比值就能反映出環(huán)境的變化,如Di4之于細胞膜電位,Cameleon之于Ca離子濃度等等。當相關(guān)的環(huán)境變化速度比較快的時候,兩個顏色的成像時間間隔越短,測量也就越準確。?
以上成像實驗,需要盡可能將兩個不同顏色熒光信號在同一時刻拍攝,理想的情況就是雙色同步成像功能,即*同時地拍攝兩個顏色通道的熒光信號。
許多實驗室通過切換顯微鏡上的濾光塊轉(zhuǎn)盤或者是采用濾光輪進行不同顏色之間切換。但這樣無法做到*同步拍攝兩個顏色的圖片,濾光塊轉(zhuǎn)盤的切換時間需要約1秒鐘,而濾光輪不同濾光片之間的每一次切換也需要幾十毫秒時間,影響了實驗的時間分辨率,所以在比較高速的比例成像等場合,采用濾光輪或者濾光塊轉(zhuǎn)盤都容易造成數(shù)據(jù)的誤差。
而采用濱松W-ViewGEMINI則*沒有這樣的擔心,兩個顏色的信號被成像到相機的上下兩半感光芯片上,實現(xiàn)了兩個顏色成像的*同步。
W-View GEMINI雙色分光附件將兩種顏色的信號成像到一臺相機的一個感光芯片上很好地解決了同步成像的時間問題,大多數(shù)的相機,整個感光芯片只能設(shè)置一個曝光時間,當兩個顏色的信號強度相差較大時將很難同時將兩個顏色的成像信噪比保證在較好狀態(tài)。濱松Flash4.0 LT則可以分別調(diào)整同一芯片上下兩半的曝光時間。所以在采用W-ViewGEMINI配合Flash4.0 LT的時候,我們可以非常靈活地調(diào)整兩個顏色信號的相對亮度,得到更加能夠突出所需信號和結(jié)構(gòu)的圖片。在兩個顏色通道的信號差別非常大的時候,F(xiàn)lash4.0 LT + W-View GEMINI這種靈活的曝光時間設(shè)置就可以針對不同的波長設(shè)置不同的曝光時間,同時保證兩個波長信號的信噪比。
W-View GEMINI分光附件 雙色同步成像不同曝光時間
雙色同步成像
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