Lightsheet熒光顯微技術(shù)

Lightsheet的目標(biāo)與共聚焦一樣，也是進(jìn)行三維成像。與傳統(tǒng)上的激光掃描共聚焦/轉(zhuǎn)盤共聚焦、雙光子共聚焦相比，Lightsheet的優(yōu)勢(shì)在于很小的光漂白（因?yàn)榧す鈷呙韫簿劢?轉(zhuǎn)盤共聚焦都會(huì)掃到焦平面外的熒光探針）以及能夠觀察大到1cm的樣品（雙光子共聚焦僅有1mm左右）。而且由于可以直接采用高-分辨率的相機(jī)直接對(duì)一個(gè)焦平面同時(shí)成像，所以針對(duì)較大樣品的時(shí)候速度也比共聚焦的掃描要更快。Lightsheet技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)超大樣品塊、快速掃描、深度成像、高-分辨率、3D動(dòng)態(tài)圖像輸出，因而受到生命科學(xué)研究者，尤其是神經(jīng)發(fā)育顯微成像領(lǐng)域的研究者的歡迎。

Lightsheet技術(shù)用途

Lightsheet傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡和MRI，CT等成像之間的空隙；在遺傳、發(fā)育等研究中有著較好的應(yīng)用及前景。因?yàn)檫z傳發(fā)育學(xué)研究者在選擇模式生物（如斑馬魚(yú)、果蠅、線蟲(chóng)等）的時(shí)候，透明以利于觀察以及生命周期短是兩個(gè)著重考量的因素；透明對(duì)于Lightsheet的作用不言而喻，生命周期短的動(dòng)植物一般也不會(huì)長(zhǎng)得太大，所以這些模式生物都比較適合于Lightsheet的功能。

Lightsheet技術(shù)操作

Lightsheet(光片照明)顯微鏡使用一層光束從樣品側(cè)面激發(fā)熒光樣品，通過(guò)sCMOS相機(jī)來(lái)檢測(cè)成像，而入射照明光路和sCMOS接收熒光光路互相垂直。通過(guò)移動(dòng)樣品使入射光面激發(fā)不同的平面，且激發(fā)光束從左右兩個(gè)方向入射到樣品上，光束的角度可以改變，這樣就可以很容易的得到整個(gè)組織的3D圖像，同時(shí)保證細(xì)胞水平的分辨率。由于樣品受激發(fā)的平面就是成像平面，所以可以將光漂白和光學(xué)損傷降低到較低。

Lightsheet技術(shù)對(duì)成像的要求

Lightsheet對(duì)于相機(jī)的主要要求是高速、高像素和高靈敏度。高速對(duì)應(yīng)了整套lightsheet所需要的時(shí)間分辨率；高像素則對(duì)應(yīng)的是樣品的尺寸，如果像素不夠會(huì)導(dǎo)致實(shí)際成像分辨率的下降；高靈敏度一個(gè)是為了減小曝光時(shí)間，另一個(gè)則是因?yàn)閘ightsheet所觀察的樣品偏厚，從樣品深處發(fā)出的熒光不可避免地會(huì)損失得比較厲害，高靈敏度有利于彌補(bǔ)這個(gè)情況。

Lightsheet技術(shù)成像產(chǎn)品

基于lightsheet技術(shù)對(duì)于成像設(shè)備分辨率、高速度、高靈敏度的基本要求，sCMOS和速度快一些的EMCCD相機(jī)能很好的勝任lightsheet成像的任務(wù)。

濱松公司的sCMOS相機(jī)Flash 4.0V3非常適合用于lightsheet成像，除此之外，濱松Flash 4.0另提供專門的Lightsheet讀出模式，更是市場(chǎng)上此項(xiàng)應(yīng)用中相機(jī)的。